Diabetologia：激活但功能受損的記憶Tregs在1型糖尿病患者進展緩慢的每一次中逐漸擴展

從第一次消失胰臟自身特異性到消失1改進型心血管疾病針灸病征的的轉變率在學童后期就有很好的描述，多個胰臟自身特異性乙改進型肝炎的學童中所有70%在血清反轉后10年內入院心血管疾病，而隨訪15年的學童這一百分比減低到84%。比起之下，%針灸1改進型心血管疾病一半以上的改進型1改進型心血管疾病的中風前提還不會獲得更好的研究成果。

更加多的人開始其所用于仍須種系統來概念1改進型心血管疾病的的轉變：個基底在消失多種胰臟自身特異性時轉至第1之前，消失高血壓異常時轉至第2之前，消失病征時轉至第3之前。一些多發胰臟自身特異性乙改進型肝炎的個基底，在1期和2期，的轉變很慢，并轉變為中風的1改進型心血管疾病。我們之前描述了一分組在首次驗證到多種胰臟自身特異性比對后至近乎少10年無心血管疾病的近乎慢的轉變者，這分組患兒人數近乎少，但特征非常明確。隨后，我們發現胰臟自身肝細胞特異性CD8+T中央線?；追雌渌诘霓D變很慢的患兒中所基本不發揮作用，但在現之前中風和依然發揮作用的心血管疾病患兒中所很難以驗證到。這或許確實，與的轉變患兒比起，這些患兒自身免疫反其所的調節增強。

早期研究成果確實，盡管調節性T中央線?；?Treg)數量正常，但心血管疾病患兒發揮作用一些功能局限性，其中所包括對IL-2的反其所能力降低。此外，心血管疾病患兒中所的現像CD4+T中央線?；谆蛟S對調節頗具抵抗性，發揮為現像T中央線?；椎囊种箿p弱，其本質轉化成的Treg和基底外轉化成的誘發Treg，以及肝細胞經歷的CD4+T中央線?；字兴鵌L-2反其所減弱。本研究成果的用意是描述了CD4+調節性T中央線?；?Treg)在一小群近乎很慢的轉變者中所的特征，他們的平均成年人為43歲(31-72歲)，隨訪時間為18-32年。

原理：BOX研究成果是一項以青年人為基礎的垂直研究成果，在21歲所列肺癌的患兒親屬中所安全檢查1改進型心血管疾病的兇險因素。我們之前描述了依然很慢的轉變者的特征，他們維持多重胰臟自身特異性乙改進型肝炎超過10年，但不會消失心血管疾病的針灸病征，慢性或非同步性功能自身免疫。隨后，10名之前維持無心血管疾病并愿意提供大量血液比對的很慢的轉變者納入T和B中央線?；坠δ苎芯?。在以外的研究成果中所，8名慢的轉變者(SP分組)，中所位成年人43歲(31-72歲)，18 - 32歲彼此之間的胰臟自身特異性乙改進型肝炎。所有的參與者都受制于1改進型心血管疾病的轉變的1期，盡管一些人隨后失去了胰臟自身特異性對某些肝細胞的乙改進型肝炎反其所，然而，一名患兒仍然受制于2期至近乎少6年，但不會消失針灸病征，一名患兒被診斷為心血管疾病，該病人72歲，在搜集實驗比對時，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在數據研究中所對該絲氨酸同步進行了單獨風險評估。復合外周血單個核中央線?；?PBMCs)，采用多常量流式中央線?；仔姆ê蚑中央線?；滓种乖囼烇L險評估絲氨酸中所Treg的振幅、表改進型和功能。其所用于FlowSOM和CITRUS(聚類鑒定、相關聯和復出)同步進行無委派聚類研究，風險評估Treg表改進型。

結果：與身心健康絲氨酸比起，來自慢的轉變基底的思緒CD4+T中央線?；椎奈删垲惪达@現出，抑制的思緒CD4+ Treg振幅減低，與低劑量誘發的TNFR相關蛋白(GITR)暗示減低有關。一名HbA1c下降的患兒與的轉變很慢者和匹配的印證分組比起，Treg磬有所各不相同。功能研究確實，與身心健康絲氨酸比起，來自很慢的轉變基底的Treg介導的CD4+現像T中央線?；滓种贡绕鹗軗p。發揮為對現像CD4+T中央線?；證D25和CD134暗示的抑止減低。

三幅1 深入的表改進型研究看顯現出，CD4+Treg亞改進型在慢的轉變函數調用中所減低。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在來自所有絲氨酸的活CD4+CD45RA -中央線?；咨?。根據標識物暗示鑒定顯現出10個元簇:思緒T中央線?；譥1;思緒T cell_2;思緒T cell_3;思緒T cell_4;CD49b思緒T中央線?；?HLA-DR + GITR +思緒T中央線?；?中央線程Treg_1;中央線程Treg_2;中央線程Treg_3;和中央線程Treg_4。(a)其所用于9個各不相同Treg標識生成的10個元簇的MST。每個結點值得一提的是一個炮兵部隊(100個炮兵部隊)，更大的元炮兵部隊(10個元炮兵部隊)在結點分組周圍成品。每個結點中所的餅三幅透露單個標識的暗示行政級別。(b)每個元聚類的熱三幅，以看顯現出整基底標識暗示。(c, d)為HD分組(c)和SP分組(d)生成三幅，以及FlowSOM辨識的每個元簇的覆蓋層。(e-l)相較豐度為每個metacluster木箱中央線三幅(豐度> 0.05%)確定為HD和SP分組:中央線程Treg_2 (e),中央線程Treg_3 (f),中央線程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思緒T中央線?；?h)、思緒T cell_1(i),思緒T cell_2 (j),思緒T cell_3 (k) n d CD49b思緒T中央線?；?l)。黃色左上角值得一提的是慈善機構SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon類推大寫字母秩核查。此鍵適用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 其所用于CITRUS的預測模改進型確認，Treg振幅的減低是的轉變很慢的標志。分級門控(a - f)和柑橘研究(g-k)較為SP參與者和匹配的HD參與者在CD4+CD45RA?T中央線?；咨系牟町?。(a)親本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l青年人的值得一提的是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3摻入，然后通過HLA-DR和GITR暗示同步進行復合，模擬FlowSOM青年人。(b) HD(黑點)和SP(黑斑)分組以及絲氨酸SP 606(黃色)中所CD25+ cd127的振幅核心內容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+門控子集的木箱中央線三幅;(c) HLA-DRloGITR?(中央線程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(中央線程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(中央線程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+中央線程T cell)。(g - i)柑桔簇錐形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示準確度漸變，箭頭突顯現出的簇被辨識為SP和HD函數調用彼此之間的各不相同。(j)木箱中央線三幅看顯現出了在SP(黑斑)和HD(灰點)分組中所，CITRUS思緒Treg_3和Treg_4的相較豐度(百分比)。(k)直方三幅看顯現出每個簇的表改進型(紅色)和Treg標識相較暗示與氛圍暗示(黃色);上列，中央線程Treg_3;下面恰巧，中央線程Treg_4。氛圍與所有其他簇中所標識的暗示有關。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon類推大寫字母秩核查

三幅3 與身心健康獻血者比起，的轉變很慢者思緒treg的GITR減低。每個思緒CD4+T中央線?；自?思緒T中央線?；譥1;思緒T cell_2;思緒T cell_3;CD49b +思緒T中央線?；?HLA-DR + GITR +思緒T中央線?；?中央線程Treg_2;中央線程Treg_3;來自FlowSOM的memory Treg_4)驗證每個暗示標識的疊加。(a,b)來自HD (a)和S (b)函數調用的暗示熱三幅(sp606不包括在內)。(c,d)思緒Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(黃色)和SP 606(黃色)的FlowSOM GITR暗示并聯，看顯現出直方三幅(c)和核心內容三幅(d)。Wilcoxon類推大寫字母秩和核查，p< 0.07(黃色)所有絲氨酸包括，p< 0.05(黃色)絲氨酸SP 606和匹配的HD不包括在測試中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR暗示，從分級門控，從所有HD(灰色)、所有SP(黃色)和SP 606(黃色)并聯，看顯現出直方三幅(e)和核心內容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon類推大寫字母秩核查

三幅4 來自很慢的轉變的CD4+ treg中央線?；卓刂片F像CD4+T中央線?；椎哪芰档?。SP分組用黃色的中央線和左上角透露，HD分組用藍色的中央線和左上角透露，黃色的中央線/左上角透露絲氨酸sp606。其所用于CD4+CD25+ Treg分選試劑盒對CD4+T中央線?；淄竭M行分選。CD4+CD25?(；也者)被標識為CFSE, Treg按觀察的百分比起始。用抗CD3 /28微珠再生中央線?；?，養成3緊接著同步進行流式中央線?；仔姆炞C。(a-d)與CD4+；也者相較其所的treg養成(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg與HD；也者養成。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。其所用于乙改進型肝炎印證(抑制的響其所中央線?；撞缓瑃reg)計算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重復測量雙向方差研究。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重較為測試

三幅5 現像CD4+T中央線?；讓苈霓D變的T中央線?；自偕囊种垢舾?。SP分組用黃色的中央線和左上角透露，HD分組用藍色的中央線和左上角透露，黃色的中央線/左上角透露絲氨酸sp606。其所用于CD4+CD25+Treg分選試劑盒對CD4+T中央線?；淄竭M行分選。CD4+CD25?(；也者)被cfsel標識，treg按觀察的百分比起始。用抗CD3 /28微珠再生中央線?；?，養成3緊接著同步進行流式中央線?；仔姆?CD25反染)和中央線?；滓蜃友芯?。HD Treg與HD、SP或sp606；也者協力養成。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑止調升(b)。(c,d) CD25抑止調升(c)和CD134抑止調升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共養成中所的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重復測量雙向方差研究。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重較為測試

結論：我們得顯現出結論的結論是，來自很慢的轉變子的再生思緒CD4+Treg在GITR暗示中所獲得了擴展和豐富，重申了進一步研究成果Treg在1改進型心血管疾病風險個基底中所的異質性的必要性。

原文顯現出處：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28